乙酰螺旋霉素组分测定中，各组分的分离情况对最终测定结果的影响较大。在实验中可以通过筛选色谱柱和优化色谱条件等方法，使各组分得到良好的分离。130347-200403批乙酰螺旋霉素标准品的组分参考图谱如下所示，在此分离条件下，可以得到较为准确可靠的测定结果。

图一 130347-200403批乙酰螺旋霉素标准品组分测定典型色谱图

图二 130347-200403批乙酰螺旋霉素标准品组分测定典型色谱图（放大）

比较理想的色谱柱是：

⑴ ZORBAX Eclipse XDS－C18，150×4.6mm或250×4.6mm，5μm。

⑵ Diamosil C18，250×4.6mm，5μm。

⑶ phenomenex Gemini 5μ C18 110A，Size 250×4.6mm。

推荐的实验条件为：

以乙腈-0.1mol/L 醋酸铵溶液（50：50）（用醋酸调节pH值至7.2±0.1）为流动相；流速为0.8ml/min；柱温为30℃。