DAPI dihydrochloride/DAPI HCL/4,6-二脒基-2-苯基吲哚,≥98% (HPLC and TLC), suitable for fluorescence
- 产品编号：D0111
- 中文名称：DAPI dihydrochloride/DAPI HCL/4,6-二脒基-2-苯基吲哚
- 英文名称：4,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride
- 英文别名:2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride
- CAS号:28718-90-3
- 分子式:C16H15N5 · 2HCl
- 分子量:350.25
- 纯度:≥98% (HPLC and TLC), suitable for fluorescence
- EC号:249-186-7
- MDL号:MFCD00012681
订货信息：
产品规格价格(RMB)
- D0111-1MG80
- D0111-10MG650
- D0111-50MG3200
性能描述
| 试剂纯度 |
≥98% (HPLC and TLC) |
| 性状 |
powder |
| 溶解性 |
H2O: soluble20 mg/mL (heat or sonication may be required. Solutions stored in the dark at room temperature or 4 °C should be stable for 2 to 3 weeks.) |
| |
PBS: insoluble |
| abs. |
ε1mM/263 nm, H2O 30 |
| fluorescence |
λex 340 nm; λem 488 nm (nur DAPI) |
| |
λex 364 nm; λem 454 nm (DAPI-DNA-Komplex) |
| suitability |
suitable for fluorescence |
| 保存温度 |
2-8°C |
Biochem/physiol Actions
Cell permeable fluorescent minor groove-binding probe for DNA. Binds to the minor groove of double-stranded DNA (preferentially to AT rich DNA), forming a stable complex which fluoresces approximately 20 times greater than DAPI alone.
Caution
Protect from light.
Application
DAPI is several times more sensitive than ethidium bromide for staining DNA in agarose gels. It may be used for photofootprinting of DNA, to detect annealed probes in blotting applications by specifically visualizing the double-stranded complex, and to study the changes in DNA and analyze DNA content during apoptosis using flow cytometry. DAPI staining has also been shown to be a sensitive and specific detection method for mycoplasma.
DAPI即4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用与荧光显微镜观测1。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。
DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
染色原理：
DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。
a、 正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。
b、 染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。
c、 染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。
d、 细胞核破裂形成碎片，核解体。
染色步骤:
在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，在用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
存储条件：-20℃避光保存
每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装
注意事项：
1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。
2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 µg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释，最终浓度100 ng/ml。
3、DAPI是非常优秀的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。
