性能描述

Application
A dual-emission potential-sensitive probe that can be used to measure mitochondrial membrane potential. JC-1 is a green-fluorescent (λex 520 nm) monomer at low membrane potential. At higher potentials, JC-1 forms red-fluorescent (λem 596 nm ) J-aggregates, which exhibit broad excitation and very narrow emission spectra. The ratio of red to green fluorescence of JC-1 is dependent only on membrane potential, and not influenced by mitochondrial size, shape, or density.

检测原理：
◆ JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。JC-1染料表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。因此颜色的变化非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。线粒体的去极化程度也可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。

◆ JC-1染料的特点：
∷ 染料用途广：可用来检测各种细胞类型包括单核细胞和神经细胞，以及完整组织和纯化的线粒体；
∷ 染料特异性更高：与其他的阳离子染料如DiOC6(3)和罗丹明123相比，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体去极化检测的检测一致性更好；
∷ 红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体大小，形状，密度的差异干扰；
∷ 检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别；

溶解方法与使用浓度：
◆ JC-1溶于DMSO溶液，配制5 mg/ml的母液。-20°C避光冻存，避免反复冻融。
◆ JC-1常用的浓度范围为1-20μg/ml（检测膜电位），对于很多细胞适宜采用的JC-1浓度为10μg/ml。
JC-1染色步骤（仅作参考）
1. 收集≥2×105的细胞，用37℃预热的新鲜完全培养基调整至1ml悬液。制备阳性对照（以去极化药物处理过的细胞）。标本和阳性对照的染色步骤相同；
2. 融化1管JC-1储存液，每1ml细胞悬液中通过边振荡边加的方式加入2.5μL（终浓度：2.5ug/ml）。振荡细胞悬液直至标本形成均一的红紫色。
3. JC-1在水相容易形成聚集体，所以需要边振荡边加。
4. 加入2ml PBS至细胞悬液中，500×g室温离心5分钟，去上清。
5. 使用0.3ml PBS重悬细胞。
6.上机取样，注意获取细胞的速度不要≥250至300细胞/秒。