生化活性：

糖皮质素抗炎剂。调控 T 细胞的存活、生长和分化。抑制一氧化氮合酶的诱导作用。

Reconstitution
To prepare 20 μg/ml stock solution, add 1ml absolute ethanol per mg product; gently swirl to dissolve. Add 49 ml sterile medium per ml of ethanol added, while mixing, to acheive final concentration of 20 μg/ml.

名称：地塞米松 　　
英文名：dexamethasone
异名：德沙美松；氟甲强的松龙；氟甲去氢氢化可的松；氟美松；甲氟烯索，地塞米松，Acidocont,Deronil,Dexacortal,dexametona,Flumeprednisolon等。 　化学名：（11β，16α）-9-Fluoro-11,17,21-trihydroxy-16-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione 　　　
CAS号：50-02-2 　　
分子式：C22H29FO5 　　
分子量：392.5

相关论文：

1.地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响

【正文快照】：
三维培养是近年发展起的技术 ,能够模仿体内的结构特点[1 ] 。肝细胞三维培养主要应用于人工生物肝研究及肝细胞疾病基础研究中 ,我们利用该技术研究地塞米松 (ｄｅｘ)对肝细胞形态的影响并探讨其机制。一、材料和方法1.肝细胞球状体 (ＨＳ)的制备 :成年雄性Ｆ344大鼠 ,6周龄

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【摘要】  目的：分离培养和鉴定人外周血树突状细胞(DC)，以及探讨地塞米松对其分化的影响作用。方法：密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，贴壁后加入GMCSF、IL4和LPS培养，部分组另加入地塞米松，观察细胞形态学、流式标志和DC与T淋巴细胞共培养后的增殖变化。结果：外周血单核细胞诱导培养后具有DC形态学特征，CD83表达上调，CD14表达下调，DC与T淋巴细胞共培养后呈增殖反应。培养液中加入地塞米松后CD83表达下调，CD14表达上调，DC与T淋巴细胞共培养后增殖反应减弱。结论：外周血单核细胞经联合细胞因子可诱导为DC；地塞米松可使DC在功能上处于不成熟状态。

【关键词】  单核细胞 树突状细胞 地塞米松 细胞因子

相关知识：
地塞米松又名氟美松、氟甲强地松龙、德沙美松，是糖皮质类激素。其衍生物有氢化可地松、泼尼松等，其药理作用主要是抗炎、抗毒、抗过敏、抗风湿，临床使用较广泛。极易自消化道吸收，其血浆T1/2为190分钟，组织T1/2为3日，肌注地塞米松磷酸钠或地塞米松醋酸酯后分别于l小时和8小时达血药浓度峰值。该品血浆蛋白结合率较其他皮质激素类药物为低.该品0.75mg的抗炎活性相当于5mg泼尼松龙。

1958年，Arth与Oliveto等分别合成了地塞米松，1960年Merck & Co.生产地塞米松磷酸钠，至今，上市的地塞米松衍生物已达12种以上。地塞米松的化学结构为泼尼松龙的B环9α位引入氟原子，D环16α位引入甲基；9α氟及16α甲基均使其抗炎活性显著增强，而16α甲基则显著地降低了地塞米松的水钠潴留副作用。地塞米松与泼尼松龙的临床生物等效剂量比为0.75:5，生物半衰期为36-54小时，列为长效糖皮质激素。地塞米松与其他糖皮质激素一样，具有抗炎、抗内毒素、抑制免疫、抗休克及增强应激反应等药理作用，故广泛应用于各科治疗多种疾病，如自身免疫性疾病，过敏，炎症，哮喘及皮肤科、眼科疾病。地塞米松磷酸钠注射剂更是抢救垂危病人不可缺少的急救药品，近十几年来，临床医师应用地塞米松磷酸钠治疗和预防各类中西药引起的药物过敏及治疗病毒性感冒引起的发烧等症，使地塞米松临床用药量逐年增加，至今中国已成为世界上最大的地塞米松市场。

地塞米松液相色谱测定方法：　　
方法名称：地塞米松原料药－地塞米松－高效液相色谱法 　　
应用范围：该方法采用高效液相色谱法测定地塞米松原料药中地塞米松的含量。该方法适用于地塞米松原料药。 　　
方法原理：供试品加甲醇溶解后用流动相稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长240nm处检测地塞米松的峰面积，计算出其含量。 试剂：1. 乙腈 　　2． 甲醇 　　仪器设备：1.仪器 　　1．1 高效液相色谱仪 　　1．2 色谱柱 　　十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按地塞米松峰计算应不低于3000。 
1．3 紫外吸收检测器 　　2．色谱条件 　　2．1 流动相：乙腈水=4 6 　　2．2 检测波长：240nm 　　2．3 柱温：室温 　　试样制备： 　　1．对照品溶液的制备 　　精密称取地塞米松对照品约15mg，置50mL量瓶中，加甲醇2mL溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。 　　2．供试品溶液的制备 　　精密称取供试品约15mg，置50mL量瓶中，加甲醇2mL溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。 　　注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 　　操作步骤：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长240nm处测定地塞米松（C22H29FO5）的峰面积，计算出其含量。

相关数据：
MDL号：MFCD00064136 　　EINECS号：200-003-9 　　RTECS号：TU3980000 　　BRN号：2066651 　　PubChem号：24893536 　　摩尔折射率：100.23 　　摩尔体积（m3/mol）：296.2 　　等张比容（90.2K）：812.3 　　表面张力（dyne/cm）：56.5 　　极化率（10-24cm3）：39.73

人外周血树突状细胞培养和地塞米松对其分化的影响作用
【摘要】  目的：分离培养和鉴定人外周血树突状细胞(DC)，以及探讨地塞米松对其分化的影响作用。方法：密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，贴壁后加入GMCSF、IL4和LPS培养，部分组另加入地塞米松，观察细胞形态学、流式标志和DC与T淋巴细胞共培养后的增殖变化。结果：外周血单核细胞诱导培养后具有DC形态学特征，CD83表达上调，CD14表达下调，DC与T淋巴细胞共培养后呈增殖反应。培养液中加入地塞米松后CD83表达下调，CD14表达上调，DC与T淋巴细胞共培养后增殖反应减弱。结论：外周血单核细胞经联合细胞因子可诱导为DC；地塞米松可使DC在功能上处于不成熟状态。

【关键词】  单核细胞 树突状细胞 地塞米松 细胞因子

　　Culture and comparison of the morphology and function of dendritic cells from human peripheral blood monocytes with and without dexamethasone

　　LI HongTao, HUANG Jin.

　　Department of Respiratory Medicine, Fifth Affiliated Hospital of Sun Yatsen University, Zhuhai 519000, China

　　［Abstract］  Objective:To study the morphology and function of the dendritic cells(DC) from human peripheral blood monocytes and the change in cell differentiation and maturation after DC treated with dexamethasone(DexDC).Methods:DCs were sorted from human monocytes by culturing in presence of cytokines(GMCSF, IL4) and LPS for 8 days with or without dexamethasone. The change in morphology, function and phenotypic characterization was compared.Results:The cells treated with or without Dex, developed a characteristic dendritic morphology, however, DexDC expressed higher level of CD14 and lower level of CD83 than the untreated cells. In addition, a low APC function was demonstrated by DexDC.Conclusion:DCs can be induced from peripheral blood monocytes in medium with cytokines; the cultured PS in presence of Dex are shown at a more immature stage, indicating that Dex modulates DC differentiation, maturation, and function.
   
　　［Key words］  Monocyte；Dendritic cell；Dexamethasone；Cytokine
   
　　激素可以抑制炎症反应和免疫，现已广泛应用于慢性气道炎症性疾病——支气管哮喘的治疗。树突状细胞（Dendritic cell, DC）通过共刺激分子及其分泌的细胞因子,专一启动初始T淋巴细胞,并决定Th1或Th2应答类型,在哮喘发病机制中发挥重要的作用。一些研究探讨了激素对DC在抗原摄取、加工及递呈等方面的作用，表明激素可以从多方面影响DC，但研究结论不一致：①刺激和不刺激MHCⅡ类分子的表达［1，2］；②降低和不降低共刺激分子水平［37］；③抑制和不抑制DC刺激的T细胞增殖［4，5，8，9］；④下调和不下调DC的特异性成熟标志CD83［7，913］。DC的不同组织学来源或不同的成熟状态可能影响上述结论。本研究试图探讨地塞米松对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)来源DC分化与T细胞增殖的影响，为进一步研究DC共刺激分子在哮喘发病机制中的作用，以及激素对其影响奠定实验基础。

　　1  材料与方法

　　1.1  试剂  淋巴细胞分离液购自上海生化二厂；重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF）和重组人白细胞介素4（rhIL4）购自PeproTech公司；脂多糖（LPS，E.coli serotype O55:B5）购自Sigma公司；FITC标记的CD83、HLADR和PE标记的CD14购自eBioscience公司；DC完全培养基包括RPMI1640（Gibco公司）、15%小牛血清（杭州四季青公司）、2 mmol/L L谷氨酰胺、10 mmol/L Hepes、100 U/ml青霉素和100 U/ml链毒素；地塞米松磷酸钠购自湖北天药医药有限公司；四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium, MTT)购自MECHEM公司；异丙醇购自天津大茂化学仪器试剂站。

　　1.2  方法

　　1.2.1  DC体外诱导和培养  新鲜分离的经肝素钠抗凝(20 U/ml)血10 ml，用DHanks液稀释1倍并混匀，然后将混匀的全血轻轻置于淋巴细胞分离液上(每10 ml全血加淋巴细胞分离液3 ml)，室温下2 000 r/min离心20分钟；用毛细吸管轻轻吸出中间的膜层细胞，用DHanks液悬浮细胞，室温下1 000 r/min离心10分钟，洗涤2次。然后用体积分数为15%小牛血清的RPMI1640培养基悬浮细胞，加入到24孔培养板中，置于37℃、5%CO2孵育箱培养2小时后弃上清，用37℃预热的RPMI1640培养液轻柔洗2次，去除非贴壁细胞，即获得贴壁的单个核细胞。再在培养板中加入含rhGMCSF 1 000 U/ml、rhIL4 500 U/ml、15%小牛血清的RPMI1640培养基常规培养。或单独rhGMCSF 1 000 U/ml培养。部分培养的细胞在GMCSF/IL4培养条件下另加入10-7 mol/L地塞米松。于培养的第6天加入细胞因子的同时再加入LPS(1 μg/ml)培养2天后，收获悬浮的细胞即为成熟DC。倒置显微镜每日观察细胞形态并摄片。

　　1.2.2  流式细胞仪细胞表型检测  收集0、3、6（加入LPS培养前）和8天（加入LPS培养后）的DCs，调整浓度为2×105 ml-1，加入Eppendorf管，每管25 μl，然后加入FITC标记的CD83、HLADR，PE标记的CD14直标单抗各5 μl，FITC和PE标记的鼠IgG1作为同型对照，4℃冰箱中避光反应30分钟，预冷的PBS洗2遍，1%的多聚甲醛固定后上流式细胞仪(FACScan flow cytometer, Becton Dickinson,美国)以488 nm激发光检测，至少采集10 000个细胞，以CellQuest和WinMDI软件分析，先应用前向角和侧向角评估细胞碎片、死亡细胞以及可能污染的红细胞，数据以标记阳性细胞百分率表示。

　　1.2.3  DC与同种异型T淋巴细胞共培养  取健康成人外周血，以淋巴细胞分离液提取PBMC，接种于24孔板，37℃、5%CO2孵育箱中贴壁2小时后，收集悬浮细胞，并经尼龙毛柱分离的T细胞作为反应细胞，用完全培养基调整细胞密度至1×106 ml-1，接种于96孔培养板，每孔内加入100 μl作为反应细胞。刺激细胞为向DC诱导的细胞，用完全培养基调整至2×105 ml-1，按刺激细胞与反应细胞的比例为1∶5、1∶10、1∶20、1∶50、1∶100分别加入到96孔板，并以完全培养基为空白对照，每组设3个复孔，终体积为200 μl。在上述条件下培养72小时加入MTT 25 μl(5 mg/ml)再培养4小时后，加入酸化异丙醇（0.04 mol/L HCl）终止反应，振荡10分钟。于波长550 nm处检测OD值，参考波长630 nm，结果以3孔均值表示。

　　1.3  统计学分析  数据以x±s表示。应用SPSS 12.0统计软件，组间比较采用t检验，P<0.05具有统计学意义。

　　2  结果

　　2.1  体外培养DC形态变化  PBMC贴壁培养3小时，获得贴壁细胞。加入细胞因子GMCSF/IL4 3小时后即可见细胞聚集呈簇状，体积小，多为圆形；培养1天后可见细胞半悬浮生长；第3天，半悬浮细胞逐渐增加，细胞呈聚集现象，体积略增大，有大突起；第5天，大部分细胞脱壁悬浮，体积增大，形状不规则；第7天，细胞体积大，脱壁悬浮，有毛刺状突起，为典型的DC形状，见图1A。
   
　　在上述培养条件下加用地塞米松后，DC的形态与未加地塞米松培养时无明显差异，见图1B。在培养液中仅加入GMCSF时，细胞随培养时间增加而体积变大，形状不规则，有大突起，未见毛刺状改变。

　　2.2  体外培养DC表型的变化  新鲜分离的人PBMC贴壁后高表达CD14，此后经联合细胞因子培养后CD14阳性细胞百分比渐下降，到培养第8天时CD14表达明显下调（P<0.05）。从培养0天至第6天加入促成熟的刺激因子前几乎不表达CD83，加入刺激因子后CD83表达率明显上升（P<0.05）。刚分离的人PBMC低水平表达HLADR，此后表达水平逐渐上升，加入刺激因子促成熟后HLADR高水平表达（P<0.05），见表1、图2A。

　　2.3  地塞米松对DC表型变化的影响  为研究地塞米松对人PBMC分离培养的DC表型的影响，我们在含有GMCSF、IL4和10-7 mol/L地塞米松的条件下培养人贴壁的PBMC。地塞米松部分抑制了LPS所诱导的CD83（P<0.05）、HLADR(P>0.05)上调，而上调了CD14的表达(P<0.05)，见表1、图2B。

　　图1  培养7天的DC（×40）（略）

　　Fig.1  Morphological characteristics of DC cultured in the media containing GMCSF,IL4,LPS for 7 days(×40)

　　Note:A.Without dexamethasone;B.With dexamethasone.

　　图2  培养不同天数细胞表面CD14、CD83变化（略）

　　Fig.2  Change in surface phenotype(CD14, CD83) of cultured cells with GMCSF/IL4/LPS over time

　　Note:A.Cultured cells without Dex;B.Cultured cells with Dex.

　　表1  DC培养前后细胞表型变化（略）

　　Tab.1  Change in cell surface phenotype after culture with and without Dex

　　Note:Before.Before culture;After.After culture;Compared with the surface phenotype before culture, 1) P<0.01;Compared with the surface phenotype in control group after culture, 2) P<0.01.

　　图3  DC刺激T淋巴细胞增殖反应（略）

　　Fig.3  Allogeneic T cell proliferation stimulated by DC with(filled squares) and without(open squares) Dex

　　Note:Compared with control group,*.P<0.05(n=5).

　　2.4  地塞米松对DC免疫刺激作用的影响  以同种异体的淋巴细胞作为反应细胞，DC作为刺激细胞并与淋巴细胞以不同的比例混和，以未加刺激细胞和反应细胞而仅加完全培养基孔作为对照。结果显示，DC具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，且刺激能力随DC与淋巴细胞比例的增加而升高，见图3。在培养液中加入10-7 mol/L地塞米松后，DC刺激T淋巴细胞增殖能力较对照组减弱（n=5，P<0.05），见图3。

　　3  讨论
   
　　人外周血单核细胞在含有细胞因子GMCSF和IL4条件下可分化为不成熟DC，表现为抗原摄取和加工能力强，T细胞增殖能力弱。经LPS刺激后，可分化为成熟DC，表现为抗原摄取和加工能力弱而T细胞增殖能力增强，并高表达共刺激分子如CD80、CD86，以及成熟DC标记——CD83。本研究培养的成熟DC具有典型的形态学改变， CD83表达上调，而单核细胞的标记CD14表达下调，有较强的刺激T细胞增殖能力，与既往研究相符。在DC培养方法中，我们也体会到本研究所应用的方法虽然较磁珠分选法获得的DC纯度低，但方便、价廉，所收获的DC可以满足后续实验的需要；合适的PBMC细胞密度约为2×106 ml-1，过高的细胞密度可使单核细胞丢失增加，收获量少，而过低的细胞密度则抑制细胞聚集与增殖。应当轻轻洗去悬浮细胞以免丢失单核细胞，但也应充分洗去淋巴细胞以增加DC纯度［14］。
   
　　我们的研究表明地塞米松抑制了DC成熟标记CD83的表达，以及T细胞增殖，而CD14表达上升，部分转化为单核细胞表型，表明激素抑制了DC的功能，使其处于不成熟状态［15］。我们的结论与一些研究相一致，但不同于另一些研究，结论差异的原因可能与DC的来源不同和不同成熟状态有关［4，5，7，9，12，13，15］。选用10-7 mol/L浓度的地塞米松是参照相关文献，以该浓度不明显影响DC数量和凋亡为参考标准［4］。我们也应用了流式细胞仪DNA倍体分析观察到培养液中加入10-7 mol/L的地塞米松后并没有增加DC的凋亡率，表明上述结果源于地塞米松对DC分化的特异性作用，而非源于细胞杀伤的非特异性结果。也有研究发现地塞米松对DC表型的影响呈剂量依赖关系［15］。地塞米松也降低脐带血来源的DC分化的特异性标志CD1a和CD83，增加CD14的表达［16］。鼠动物模型也表明激素可以抑制DC成熟及T辅助细胞的活化［17，18］。
   
　　本研究表明激素抑制炎症反应的机制之一在于抑制DC的分化、成熟和功能，与Piemonti等［10］结论一致。由于DC特性是可以刺激初始T细胞增殖，诱导初次免疫应答，故抑制DC的功能可以有效地控制特异性免疫反应。本研究初步观察了激素对健康人PBMC来源DC分化成熟及功能的影响，为进一步探讨激素对哮喘病人DC的影响奠定实验基础。

【参考文献】
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　　2 Holt P G，Thomas J A. Steroids inhibit uptake and/or processing but not presentation of antigen by airway dendritic cells ［J］. Immunol, 1997; 91:145150.

　　3 Kitajima T, Ariizumi K, Bergstresser P R et al. A novel mechanism of glucocorticoidinduced immune suppression: the inhibition of T cellmediated terminal maturation of a murine dendritic cell line ［J］. J Clin Invest, 1996; 98:142147.

　　4 Xia C Q, Peng R, Beato F et al. Dexamethasone induces IL10producing monocytederived dendritic cells with durable immaturity ［J］. Scand J Immunol, 2005;62:4554.

　　5 Vieira P L, Kalinski P, Wierenga E A et al. Glucocorticoids inhibit bioactive IL12p70 production by in vitrogenerated human dendritic cells without affecting their T cell stimulatory potential ［J］. J Immunol, 1998; 161:52455251.

　　6 De Jong E C, Vieira P L, Kalinski P et al. Corticosteroids inhibit the production of inflammatory mediators in immature monocytederived DC and induce the development of tolerogenic DC3 ［J］. J Leukoc Biol, 1999;66:201204.

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　　10 Piemonti L, Monti P, Allavena P et al. Glucocorticoids affect human dendritic cell differentiation and maturation ［J］. J Immunol, 1999; 162: 64736481.

　　11 Woltman A M, De Fijter J W, Kamerling S W et al. The effect of calcineurin inhibitors and corticosteroids on the differentiation of human dendritic cells ［J］. Eur J Immunol, 2000;30: 18071812.

　　12 Kalthoff F S, Chung J, Musser P et al. Pimecrolimus does not affect the differentiation, maturation and function of human monocytederived dendritic cells, in contrast to corticosteroids ［J］. Clin Exp Immunol, 2003; 133:350359.

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